Pacific Biosciences fører i øjeblikket denne operation. Betjeningen af realtidssekventering involverer afbildning af kontinuerlig inkorporering af farvestofmærkede nukleotider under DNA syntese: enkelt DNA polymerasemolekyler er bundet til bundoverfladen af individuelle nul-modus bølgelederdetektorer (Zmw-detektorer), der kan opnå sammenkædningsinformation, hvorimod phospholinkede nukleotider inkorporeres i den voksende primerstreng. Pacific Biosciences bruger en unik DNA polymerase, som bedre inkorporerer phospholinkede nukleotider og muliggør omudskiftning af lukkede cirkulære skabeloner. Mens en enkeltlæsningsnøjagtighed er 87%, er konsensusnøjagtighed blevet påvist til 99,999% med læse-længder på flere kilobase. I 2015 frigav Pacific Biosciences et nyt sekvenseringsinstrument kaldet Sequel System, hvilket øger kapaciteten ca. 6,5 gange.
DNA blanding
DNA blanding er en måde at hurtigt propagere gavnlige mutationer i et rettet evolution eksperiment. Det bruges til hurtigt at øge DNA biblioteksstørrelse.
Proceeding
Først bruges DNase til at fragmentere et sæt af overordnede gener i stykker med en længde på 50-100 bp. Dette efterfølges af en polymerasekædereaktion( PCR) uden primere- DNA -fragmenter med tilstrækkelig overlappende homologous sammenhænding anneales til hinanden og forlænges derefter med DNA polymerase.
Billede 155A | PacBio SMRT-teknologi og Oxford Nanopore kan bruge uændret DNA til at støde på methylering. | Nivretta Thatra / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:3rd_gen_Epigenetics.png) fra Wikimedia Commons
Forfatter : Yavor Mendel
Kommentarer
Send en kommentar