Bortset fra knock-out er der desuden knock-down( CRISPRi) og aktiverings( CRISPRa) biblioteker, der bruger dygtighed af proteolytisk deaktiverede Cas9-fusionsproteiner (dCas9) for at binde objektivt DNA, hvilket betyder det gen af interesse ikke skæres, men overudtrykkes eller undertrykkes. Det gjorde CRISPR / Cas9-systemet endnu mere interessant i genredigering. Inaktiv dCas9-proteinmoduleret genform til ekspression ved at målrette dCas9-repressorer eller aktivatorer mod promotor eller transkriptionelle startsteder af objektive gener. Til undertrykkelse af gener kan Cas9 smeltes sammen til KRAB effektordomæne, der udgør complex med gRNA, mens CRISPRa anvender dCas9 fusioneret til forskellige transkriptionelle aktiveringsdomæner, der endvidere er rettet af gRNA til promotorregioner til at upregulere ekspressionsform.
Applikationer
Sygdomsmodeller
Cas9 genomisk modifikation har gjort det muligt for hurtig og effektiv generation af transgene modeller inden for genetikområdet. Cas9 kan let introduceres i de objektive celler sammen med sgRNA via plasmid transfection i regulering for at modellere spredningen af sygdomme og cellens respons på og forsvar mod infektion. Kendskabet til Cas9, der skal introduceres in vivo, muliggør oprettelse af mere nøjagtige modeller af genservicerings- og mutationseffekter, alt sammen på den anden side undgår man de off-target-mutationer, der normalt observeres ved ældre genteknologiske metoder.
Billede 171A | Oversigt over transfection og DNA spaltning af CRISPR-Cas9 (crRNA og tracrRNA er ofte forbundet som en enkelt streng af RNA, når man designer et plasmid) | Nielsrca / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:CRISPR_transfection.png) from Wikimedia Commons
Forfatter : John Kaisermann
Kommentarer
Send en kommentar